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生化實(shí)驗(yàn)室15大常識
標(biāo)簽 離心機(jī) 移液器 ** cc 克隆載體
[導(dǎo)讀] 生化實(shí)驗(yàn)室15大常識。
1.在重蒸酚中為什么加入0.1%的8-羥基喹啉及少量巰基乙醇?
保存在冰箱中的酚,容易被空氣氧化而變成粉紅色,這樣的酚容易降解DNA,一般不可以使用。為了防止酚的氧化,可加入0.1%的8-羥基喹啉及少量巰基乙醇。8-羥基喹啉是帶有淡黃色的固體粉沫,不僅能抗氧化,并在一定程度上能抑制DNase的活性。
2.如何將不同構(gòu)型的質(zhì)粒DNA區(qū)別開?
由于不同構(gòu)型的DNA在瓊脂糖凝膠電泳中的遷移率不同,cccDNA的泳動速度*快,通過凝膠電泳方法可將不同構(gòu)型的DNA區(qū)別開。
3.用酚-氯仿抽提細(xì)胞基因組DNA時(shí),通常要在酚-氯仿中加少許異戊醇,為什么?
異戊醇可以降低表面張力,從而減少氣泡產(chǎn)生。另外,異戊醇有助于分相,使離心后的上層含DNA的水相、中間的變性蛋白相及下層有機(jī)溶劑相維持穩(wěn)定。
4.用乙醇沉淀DNA時(shí),為什么加入單價(jià)的陽離子?
用乙醇沉淀DNA時(shí),通常要在溶液中加入單價(jià)的陽離子,如NaCl或NaAc,Na+中和DNA分子上的負(fù)電荷,減少DNA分子之間的同性電荷相斥力,而易于聚集沉淀。
5.在提取RNA時(shí)經(jīng)常使用異硫氰酸胍,有什么作用?
RNA是一種極易降解的核酸分子。高濃度強(qiáng)變性劑異硫氰酸胍使細(xì)胞結(jié)構(gòu)迅速被破壞,使RNA從細(xì)胞中釋放出來。同時(shí)高濃度異硫氰酸胍還使細(xì)胞內(nèi)的RNA酶失活,使釋放出的RNA不被降解。
6.蛋白印跡中封閉液的作用?
封閉液的作用是封閉未吸附蛋白的部位,以減少非特異性結(jié)合背景的影響。常用的封閉液有脫脂奶粉、小牛血清等。
7.DNA通常保存在什么緩沖液中?
采用TE緩沖液,Tris-HCl的緩沖系統(tǒng),加入EDTA可以螯合二價(jià)金屬離子進(jìn)而抑制依賴于二價(jià)金屬離子的DNA酶的活性,對DNA起到保護(hù)作用。
8.在酶切反應(yīng)緩沖液中為什么加入BSA?
通過提高溶液中蛋白質(zhì)的濃度,對酶起保護(hù)作用。
9.簡單的克隆載體必需包括什么?
復(fù)制起點(diǎn);選擇標(biāo)記:主要是抗性基因;多克隆位點(diǎn):便于外源DNA的插入。
10.用酚抽提細(xì)胞DNA時(shí),有什么作用?
使蛋白質(zhì)變性。
11.在分離DNA時(shí),要使用EDTA,為什么?
EDTA是金屬離子螯合劑,螯合二價(jià)離子,抑制核酸酶的活性。
12.在分離DNA過程中,造成DNA分子斷裂的因素有哪些?
核酸酶降解;化學(xué)降解;物理剪切。
13.使用離心機(jī)應(yīng)注意什么?
首先應(yīng)該根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需求選擇合適的離心機(jī)和轉(zhuǎn)子以及離心管,使用離心機(jī)時(shí)的工作轉(zhuǎn)速不應(yīng)該超過離心機(jī)、轉(zhuǎn)子以及離心管的*大允許轉(zhuǎn)速。離心前注意嚴(yán)格平衡樣品。安裝轉(zhuǎn)子和轉(zhuǎn)子蓋要規(guī)范、準(zhǔn)確。離心時(shí)要留人看守,發(fā)現(xiàn)離心機(jī)異常應(yīng)立即關(guān)閉離心機(jī)。離心結(jié)束后要安放好轉(zhuǎn)子。
14.分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室常用的**方法有哪些?
高壓蒸汽**、干熱**、化學(xué)藥劑**、過濾**。
15.使用移液器有哪些注意事項(xiàng)?
垂直吸液、慢吸慢放;選擇合適的量程范圍,不能超過量程使用;選擇與移液器匹配的槍頭,安裝槍頭時(shí)不要用力太猛;移液器每日用完后,應(yīng)旋到*大刻度。
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